RSR AQP4Ab試劑盒(如RSR AQP4 Ab ELISA V2)是一種用于定量檢測人血清中水通道蛋白4自身抗體(AQP4 Ab)的工具，主要用于輔助診斷視神經(jīng)脊髓炎(NMO)及相關(guān)疾病譜(NMOSD)。以下是其測定步驟：
 

　　1.樣本準(zhǔn)備：采集患者的血清、腦脊液或其他相關(guān)液體樣本作為檢測材料。確保樣本采集過程符合標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，避免污染和溶血等情況影響檢測結(jié)果。
 

　　2.加樣與反應(yīng)
 

　　-加入標(biāo)準(zhǔn)品/質(zhì)控品：在微孔板上相應(yīng)的位置加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控樣品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線和監(jiān)控實驗的準(zhǔn)確性。
 

　　-加入待測樣本：將處理好的待測樣本依次加入到指定的微孔中。
 

　　-添加AQP4-生物素：向各孔中加入溶解后的AQP4-生物素標(biāo)記物，使待測樣本中的抗體(AQP4 Ab)可同時與包被在微孔中的抗原(AQP4)和生物素標(biāo)記的抗原結(jié)合。
 

　　3.孵育與洗滌
 

　　-室溫震蕩孵育：在室溫下進行一定時間的震蕩孵育，通常為兩小時左右，以保證抗原抗體充分反應(yīng)。
 

　　-洗板：孵育結(jié)束后，使用適當(dāng)?shù)木彌_液清洗微孔板，去除未結(jié)合的物質(zhì)，以減少背景干擾。
 

　　4.顯色反應(yīng)：按照說明書的要求加入相應(yīng)的酶標(biāo)試劑和其他必要的成分，引發(fā)顯色反應(yīng)。通過酶聯(lián)作用使底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物，顏色的深淺與樣本中AQP4 Ab的濃度成正比。
 

　　5.測定吸光度：使用酶標(biāo)儀在特定波長(如405nm、450nm)下測定各孔的吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測樣本中AQP4 Ab的濃度。
 

　　RSR AQP4Ab試劑盒的基本工作原理：
 

　　1.雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)：該試劑盒應(yīng)用了雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)。具體來說，用純化的人水通道蛋白4(AQP4)抗體包被微孔板，制成固相抗體。往包被單抗的微孔中依次加入含有AQP4Ab的水通道蛋白樣本。如果樣本中含有目標(biāo)抗體，則會與固相上的抗體結(jié)合形成復(fù)合物。再通過加入標(biāo)記有辣根過氧化物酶(HRP)的檢測抗體，使其進一步與已結(jié)合在固相上的抗原-抗體復(fù)合物反應(yīng)，通過顯色反應(yīng)來定量測定樣本中的AQP4Ab水平。
 

　　2.特異性識別與結(jié)合：由于使用了針對特定抗原(即水通道蛋白4)的高度特異性抗體作為捕獲和檢測工具，因此能夠確保只有與目標(biāo)分子相關(guān)的免疫反應(yīng)被記錄下來，從而提高了檢測的準(zhǔn)確性和可靠性。